天胡荽藥材中槲皮素的實(shí)驗(yàn)鑒定論文
1 儀器與試藥
Agilent1100型高效液相色譜儀（自動(dòng)進(jìn)樣品），二極管陣列檢測(cè)器（DAD）； AB104-N型電子天平（德國(guó)Mettler-Toledo Group公司）；薄層色譜硅膠G（青島海洋化工有限公司）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純，水為重蒸鎦水；槲皮素對(duì)照品（中國(guó)藥品生物制品檢定所，批號(hào)：100081-200406）；10批天胡荽藥材樣品采自貴州各地，經(jīng)筆者鑒定為傘形科植物天胡荽Hydrocotyle sibthorpioides Lam.和破銅錢(qián)Hydrocotyle sibthorpioides Lam.Var.batrachium（Hance）Hand.-Mazz.ex Shan的干燥全草。
2 方法與結(jié)果
2.1 定性鑒別
2.1.1 供試品溶液的制備
取干燥至恒重的天胡荽藥材粉末約3 g，精密稱(chēng)重，置圓底燒瓶中，精密加入甲醇-25%鹽酸溶液（4∶1）提取液75 ml，置水浴中加熱回流1 h，濾過(guò)，將濾液水浴蒸干，用適量蒸餾水溶解，移至分液漏斗中，加醋酸乙酯30 ml（10，10，10 ml）萃取，合并醋酸乙酯萃取液，減壓回收醋酸乙酯至干，殘?jiān)蛹状?ml使溶解，取上清液作為供試品溶液。
2.1.2 對(duì)照品溶液的制備
精密稱(chēng)取槲皮素對(duì)照品13.6 mg，置50 ml的量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。
2.1.3 薄層色譜法［4］
照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取供試品溶液及槲皮素對(duì)照品溶液各10 μl分別點(diǎn)于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的`硅膠G薄層板上，以甲苯-醋酸乙酯-甲酸（5∶4∶1）為展開(kāi)劑，置鹽酸蒸氣飽和的展開(kāi)缸內(nèi)，展開(kāi)，取出，晾干。供試品色譜中，在與對(duì)照品相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)。
2.2 HPLC測(cè)定
2.2.1 色譜條件
色譜柱為Dikma公司Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μｍ）；流動(dòng)相為乙腈- 0.1%磷酸（45∶55）；流速0.8 ml/min。檢測(cè)波長(zhǎng)370 nm，柱溫25℃。進(jìn)樣量10 μl。理論塔板數(shù)按槲皮素計(jì)算，應(yīng)不低于5 000。在此色譜條件下，槲皮素對(duì)照品、天胡荽藥材的HPLC圖譜見(jiàn)圖1～2。
2.2.2 對(duì)照品溶液的制備
精密吸取“2.1.2”項(xiàng)下的槲皮素對(duì)照品溶液1ml，置25ml的容量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，作為對(duì)照品溶液。取干燥至恒重的天胡荽藥材粉末約0.5 g，精密稱(chēng)重，置50 ml具塞錐形瓶中，精密加入甲醇-25%鹽酸溶液（4∶1）提取液25 ml，稱(chēng)定重量，置水浴中加熱回流1 h，放冷，稱(chēng)重，用提取液補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，精密吸取續(xù)濾液5 ml至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，用微孔濾膜（0.45 μm） 濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得供試品溶液。
2.2.3 線性關(guān)系考察
精密吸取槲皮素對(duì)照品溶液1.0，2.0，4.0，6.0，8.0，10.0 μl，進(jìn)樣，測(cè)定峰面積，以色譜峰面積為縱坐標(biāo)， 槲皮素進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸分析，線性回歸方程： Y=6 442.9X-1.491 5，r=0.999 8，結(jié)果表明槲皮素在0.010 88～0.108 8 μg進(jìn)樣量與峰面積的線性關(guān)系良好。對(duì)照品溶液10 μl，連續(xù)進(jìn)樣5次，記錄色譜圖，結(jié)果槲皮素峰面積的RSD為0.19%。取同一供試品溶液，分別在0，2，4，6，8，10 h進(jìn)樣，記錄色譜圖，結(jié)果槲皮素峰面積的RSD為1.15%。表明供試品溶液在10 h內(nèi)穩(wěn)定。取同批藥材5份，精密稱(chēng)定，按“2.2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備并測(cè)定，槲皮素平均含量為0.11%，RSD為0.96%。
3 結(jié)果
天胡荽為傘形科植物天胡荽或破銅錢(qián)的干燥全草，具有清熱解毒、利濕之功效，用于黃疸型肝炎、膽結(jié)石、目翳［1］治療。天胡荽含槲皮素（quercetin）、槲皮素-3-半乳糖苷（quercetin-3-galactoside）等黃酮類(lèi)化合物［2］，其中槲皮素具有抗炎、抗氧化、抗癌和抗突變等多種功能［3］，是天胡荽藥材的有效成分之一。通過(guò)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，在槽內(nèi)先加入展開(kāi)劑，再在展開(kāi)缸內(nèi)用小燒杯盛上鹽酸，然后進(jìn)行薄層板預(yù)飽和30min，再展開(kāi)，其色譜斑點(diǎn)圓而集中，分離度較好。天胡荽藥材除了含有槲皮素外，還有多種黃酮苷，本文以鹽酸和硫酸作為水解酸進(jìn)行了比較，還對(duì)水解酸的濃度、溶劑和提取時(shí)間進(jìn)行了考察。結(jié)果本文所用的條件較好。
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